▎药明康德/报导
说到医治癌症的细胞疗法，咱们首要想到的或许是CAR-T细胞疗法和TCR细胞疗法。两款CAR-T细胞疗法现已取得FDA同意上市，它们在医治白血病方面现已取得了超卓的作用。但是，在医治实体瘤方面，CAR-T和TCR细胞疗法取得的发展却十分有限。在本年的ASCO年会上，一种现已有30年前史的细胞疗法却异军突起，在医治黑色素瘤和宫颈癌患者的临床实验上取得了超卓的成果。这便是Iovance Biotherapeutics公司的肿瘤滋润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte，TIL）疗法。跟着这一打破性发展的呈现，对TIL疗法的重视也日积月累。今日药明康德内容团队将与读者介绍TIL疗法的宿世、此生和未来。
肿瘤微环境中的肿瘤滋润细胞（图片来历：Frontiers in oncology [CC BY 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/3.0)]）
肿瘤滋润淋巴细胞，在“前哨”与癌细胞作战的“兵士”
肿瘤滋润淋巴细胞（TIL）是脱离血液循环，迁移到肿瘤邻近的淋巴细胞，它们包含T细胞，B细胞。如果把人体免疫系统对癌症的反响比作一场战役，TIL是从身体遍地奔往前哨，与癌细胞作战的“兵士”。它们可以起到杀伤癌细胞的作用。肿瘤中TIL的多少是猜测癌症患者预后和对免疫疗法反响的重要目标。
但是，尽管TIL呈现在肿瘤的微环境中，却不意味着癌细胞就可以被消除。许多时分，在肿瘤中呈现的TIL太少，并且被肿瘤微环境中的多种要素按捺了杀伤癌细胞的才能。沿袭战役的比方，这些抵达前哨的兵士，有的被敌人“招安”（遭到PD-L1或免疫按捺细胞的按捺），还有的现已战斗了太久，皮开肉绽没有什么战斗力（T细胞耗竭）。
前史“悠长”的TIL疗法
已然这些“兵士”具有和癌细胞作战的才能，那么咱们能不能想个办法让它们从头勃发芳华，前进它们的数目，增强它们的战斗力呢？这是美国国家癌症研讨所（NCI）的Steven Rosenberg博士和他的搭档们想要处理的问题。说到TIL疗法，就需求说到Steven Rosenberg博士，早在1988年，他作为榜首作者，就在《新英格兰医学杂志》上宣布研讨，标明运用从转移性黑色素瘤安排中别离，在体外经过IL-2影响培育并增殖的TIL，在注回患者体内后可以为60%的患者带来缓解。
Rosenberg博士是TIL疗法的前驱。他和搭档的研讨创始了运用IL-2影响TIL，促进TIL细胞增殖的培育办法。时至今日，Rosenberg博士领导的团队还在进行TIL疗法的临床实验，力求扩展TIL疗法的运用规模。
尽管与CAR-T和TCR疗法比较，TIL疗法的前史“悠长”，但是前史上，它的运用一向面临着两大难题：1，将从患者的肿瘤安排中别离的TIL进行扩增和激活是一个费时吃力的大工程。2，TIL疗法对黑色素瘤尽管作用显著，但是在医治其它类型癌症时的作用却不显着。近年来，在研制人员的不断尽力下，这两重妨碍正在被打破。
Steven Rosenberg博士（图片来历：Rhoda Baer (Photographer) [Public domain]
TIL疗法的制作进程和它的优势
TIL疗法与CAR-T和TCR细胞疗法的差异在于，T细胞不需求经过基因工程的改造。TIL疗法的根本进程是：研讨人员从患者体内取出新鲜肿瘤安排，在体外将它们打散，在细胞培育环境下经过运用成长因子（一般为IL-2和CD3受体激动剂）来影响T细胞的增殖。T细胞的扩增进程一般需求5-6周的时刻，可以将T细胞的数目增加到500亿个。
在将TIL输回患者体内之前，患者一般需求承受铲除淋巴细胞的化疗（lymphodepleting chemotherapy）。这一进程可以削弱身体中已有的淋巴细胞对促进T细胞成长的成长因子的竞赛，并且铲除其它按捺T细胞功用的细胞，比方调理性T细胞（Treg）和髓源性按捺细胞（MDSc）。它可以协助输回体内的TIL细胞在体内定植和发挥功用。输回患者体内的TIL细胞可以存活很长时刻，MD安德森癌症中心（MD Anderson Cancer Center）的研讨标明，在输回患者体内5年之后，依然有许多TIL存留在患者体内。多年来的研讨现已大幅度前进了从肿瘤安排中搜集和扩增TIL的技能。现在NCI和Iovance公司报告他们可以在超越90%携带大肿瘤（bulky tumor）的患者中成功搜集TILs。
与CAR-T和TCR细胞疗法比较，TIL疗法存在着一系列优势。首要，TIL疗法由靶向癌细胞中多种抗原的T细胞组成，因而可以经过多个靶点激起对癌细胞的细胞毒性反响。而CAR-T和TCR细胞疗法一般只能靶向一个抗原，这让癌细胞或许更简单对它们发生抗性。现在，TCR和CAR-T疗法在医治实体瘤方面发展有限，而TIL疗法现已在多种癌症类型中发生了可喜的作用。因为TIL疗法运用的细胞是迁移到肿瘤中的天然TIL细胞，研讨人员现在还未观察到它们的脱靶效应和激起细胞因子开释综合征的才能。它或许防止困扰TCR和CAR-T细胞疗法的毒副作用。
TIL疗法与TCR和CAR-T疗法的比较（图片来历：参考资料[2]）
在研TIL疗法
现在，多家学术安排和生物技能公司在开发TIL疗法。其间包含Iovance公司，由MD安德森癌症中心和Berkeley Lights联合创立的Optera Therapeutics公司，TILT Biotherapeutics公司等等。Iovance公司的TIL疗法的临床进展最快，在本年ASCO年会上，该公司开发的lifileucil（LN-144）和LN-145分别在医治黑色素瘤和宫颈癌患者的临床实验中体现出优异的作用。Lifileucil在承受过多种疗法医治的转移性黑色素瘤患者中，到达38%的客观缓解率和80%的疾病操控率。这些患者中许多现已承受过PD-1按捺剂医治。该公司开发的LN-145疗法取得了FDA颁发的打破性疗法确定，在医治宫颈癌患者时到达44%的缓解率和11%的完全缓解率。该公司计划在2020年递送lifileucil和LN-145的生物制剂答应请求（BLA）。
而NCI的Stephanie L Goff博士在本年的ASCO年会上也报告了NCI进行的TIL临床实验的成果。实验成果标明，从转移性黑色素瘤患者中获取的TIL，可以到达23.7%的完全缓解率。并且其间许多患者现已无癌超越5年时刻。
“TIL疗法有才能消除最终一个癌细胞，“她说。
她和Rosenberg的研讨团队在运用TIL医治其它类型癌症方面也取得了打破，在ASCO年会上，她报告了一名乳腺癌患者，在承受TIL医治后到达完全缓解的比如。
TIL疗法的限制和未来
尽管TIL疗法在近年来取得了长足的前进，但是，生成满足的TIL细胞依然是研制人员需求面临的应战。“（根据我现在的了解）TIL疗法要发生作用，需求生成比CAR-T疗法多100倍的细胞，大约需求300-500亿个细胞，“Goff博士表明：”冰冻冷藏这么多细胞，然后在冻结进程中保持它们的活性是一个严重应战。“ 并且，生成这么多细胞需求时刻，关于病重的患者来说，他们或许无法等那么久。Iovance公司的出产工艺现在可以在22天内完结TIL疗法的出产。业界人士以为，TIL细胞的出产时刻需求压缩到1个月以下，才能在大部分患者中运用。
TIL疗法制作流程（图片来历：参考资料[2]）
在黑色素瘤和宫颈癌之外，TIL疗法对其它癌症类型的成功率并不高。这或许是因为像乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌等癌症品种的免疫原性不强，从患者肿瘤安排中搜集的TILs中，可以杀伤癌细胞的部分很少，因而即使扩增了许多倍，输入到患者体内的TILs仍是不能有用对肿瘤发其进犯。
Rosenberg的研讨团队处理这一难题的办法是对TIL进行挑选，它们经过对肿瘤进行基因组测序，发现发生新抗原的基因序列，然后将这些表达新抗原的基因序列导入到抗体呈现细胞（APC）中。然后，用这些表达患者新抗原的抗体呈现细胞对从患者体内取得的T细胞进行挑选，将对新抗原发生反响的T细胞进行扩增并输回患者体内。这一战略让TIL疗法可以在从上皮安排中生成的癌症类型中（epithelial cancers）到达15%的缓解率。
但是，这一进一步挑选的进程又延长了疗法出产的时刻，现在这一新抗原TIL疗法的出产时刻长达10周，关于许多癌症患者来说，这太慢了！
本年一月建立的Myst Therapeutics公司是致力于处理这一问题的生物技能公司之一。该公司的创始人Timothy Langer先生从前在Kite Pharma公司任职，开发CAR-T疗法Yescarta和靶向新抗原的TCR疗法产品。在他看来，4-5年前，CAR-T疗法的制作进程也从前被以为是很难处理的应战。他说，有了开发CAR-T产品的经历，他觉得缩短TIL疗法的出产时刻是一个履行层面上的问题。
TIL治好癌症的潜力正在招引更多的公司和研讨安排投身到这一范畴。在NCI的临床实验中到达完全缓解的46名黑色素瘤患者中，只要两名患者呈现复发。固然，TIL疗法在黑色素瘤以外的癌症类型中的体现，将决议它的医治潜力。咱们等待研制人员的不断尽力，TIL疗法可以为更多类型的癌症患者谋福。
参考资料：
[2] Iovance Biotherapeutics Corporation Presentation. Retrieved September 13, 2019, from http://ir.iovance.com/static-files/3b499f52-cab7-4394-8e23-936d1ad3c4c6
[3] Tumor-Infiltrating Lymphocytes ‘Capable of Destroying the Last Cancer Cell’. Retrieved September 13, 2019, from https://e4c9%7D/tumor-infiltrating-lymphocytes-capable-of-destroying-the-last-cancer-cell
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